載脂蛋白E(Apolipoprotein E，ApoE) 是血漿脂蛋白的重要組成部分，參與血漿膽固醇、甘油三脂的運輸及代謝過程，在脂類代謝及維持膽固醇平衡等方面發(fā)揮著關鍵作用，是脂類代謝和心血管疾病的決定因子。ApoE還參與激活水解脂肪的酶類，并有免疫調節(jié)、參與神經組織的再生及抑制血小板聚集等作用。

一、ApoE基因多態(tài)性概述

ApoE是由299個氨基酸組成的磷脂糖蛋白，分子量約為34kD，主要存在于乳糜微粒及其殘骸、極低密度脂蛋白、低密度脂蛋白和部分高密度脂蛋白表面，少部分在血液中與ApoAⅡ形成復合體。ApoE主要由肝臟中的肝實質細胞和腦組織中的星形膠質細胞合成，未與脂質結合時被凝血酶分解為兩個單獨的結構區(qū)域，N端區(qū)和C端區(qū)。N端具有結合脂質和受體的功能；C端具有調節(jié)組織細胞攝取脂質的能力，起調節(jié)機體脂質代謝平衡的作用。

ApoE基因位于人類第19號染色體長臂上，由3597個核苷酸組成，屬于常染色體顯性遺傳基因，具有顯著遺傳多態(tài)性。ApoE基因的基因型由兩個單核苷酸多態(tài)性位點（即526C>T和388T>C）決定，包含3個等位基因：E2（388T-526T）、E3（388T-526C）、E4（388C-526C），其中E3為野生型基因，E2和E4為突變型基因，共產生3種純合子（E2/2、E3/3、E4/4）和三種雜合子（E2/3、E2/4、E3/4）。

ApoE基因三種等位基因堿基序列差異引起的氨基酸變化及蛋白質構象改變，使得三種異構體與受體的親和力不同，最終導致不同表型的ApoE在人體代謝中發(fā)揮不同的作用。研究表明，ApoE的基因多態(tài)性與個體血脂水平及動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展密切相關。E2等位基因攜帶者血液中ApoE濃度高，膽固醇含量低，對動脈粥樣硬化有防護作用；而E4等位基因攜帶者血液中ApoE濃度低，膽固醇及三酰甘油含量高，是動脈粥樣硬化的潛在危險因素。另外，多項研究表明ApoE基因多態(tài)性是他汀類藥物調脂療效出現(xiàn)個體差異的重要原因之一，E2等位基因攜帶者對于他汀類藥物的療效優(yōu)于E3、E4等位基因攜帶者，基因型為E2/2的高血脂癥患者建議選用普伐他汀治療，以提高降脂療效。

檢測ApoE基因多態(tài)性，有助于臨床醫(yī)生準確分析患者ApoE基因型，可為相關的疾病如高脂血癥、冠心病、阿爾茨海默癥等產生的原因提供參考，同時也為患者合理有效的使用他汀類藥物提供依據(jù)。

目前檢測ApoE基因多態(tài)性的實驗室檢測方法主要有：直接測序法、高效液相色譜法（DHPLC）、PCR-芯片雜交法、限制性片段長度多態(tài)性檢測法（PCR-RFLP）、PCR-金磁微粒層析法、熒光PCR法、PCR-溶解曲線法、飛行時間質譜法等。

二、ApoE基因多態(tài)性檢測試劑的上市批準情況

依據(jù)我國《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》，ApoE基因多態(tài)性檢測相關試劑屬于“與人類基因檢測相關的試劑”，應按照第三類產品進行管理。截止2023年1月，我國已批準了8個ApoE基因多態(tài)性檢測試劑相關產品，檢測的基因位點均為526C>T和388T>C，適用樣本類型均為全血，檢測方法涉及熒光PCR法、PCR-芯片雜交法、PCR-RFLP法等，用于檢測ApoE基因526C>T和388T>C位點的基因多態(tài)性。

三、ApoE基因多態(tài)性檢測試劑的審評關注點

（一）企業(yè)參考品設置

企業(yè)參考品的樣本類型應與待測樣本一致，可采用臨床樣本或其提取的核酸。陽性參考品和檢出限參考品應包含每一位點的純合突變型、雜合突變型和野生型；陰性參考品應考慮檢測特異性評價，納入同源序列交叉反應樣本和干擾樣本。重復性參考品應至少包含雜合突變型樣本。

（二）檢出限

可采用梯度濃度的人基因組DNA樣本進行多次重復檢測，確定適當檢出率水平下的最低人基因組DNA濃度，作為檢出限濃度。同時，該類產品的檢出限研究還應評價試劑在確定檢出率水平下，可準確檢出人基因組DNA濃度的上限。研究用樣本應至少包含雜合型突變樣本。

（三）分析特異性

需針對可能存在的內源和外源性干擾物進行充分驗證，同時應針對同源序列其他位點序列突變進行交叉反應驗證，并說明交叉反應樣本的制備方法和核酸序列確認方法。

（四）陽性判斷值

該類產品的陽性判斷值研究應考慮人種差異，納入不同民族或種族的樣本，同時應涵蓋所有突變位點的野生型和突變型，采用受試者工作特征（ROC）曲線的方式進行研究。如果試劑判讀存在灰區(qū)，還詳細應說明灰區(qū)范圍的確定方法。

四、小結

近年來隨著分子生物學的不斷發(fā)展，申報ApoE基因多態(tài)性檢測產品的企業(yè)越來越多，且有采用直擴熒光PCR法等新方法的檢測產品申報注冊，有必要對審評過程中需要關注的重點問題進行總結和規(guī)范，為相關申報企業(yè)在設計開發(fā)此類產品和準備注冊申報資料時提供有效指導，同時也為注冊審評提供參考依據(jù)。

參考文獻：

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[3]田余，趙瑞平.ApoE及SLCO1B1基因多態(tài)性與他汀類藥物的研究進展[J].世界最新醫(yī)學信息文摘，2018，18（72）：153-155.

 轉載： 中國器審   審評六部 李鵬飛